이서휴게소(伊西休憩所)는 대한민국 전북특별자치도 완주군 이서면에 위치한 호남고속도로의 고속도로 휴게소이다. 호남고속도로 본선 구간에 설치되어 있으며, 천안 방향과 순천 방향 양방향 모두 휴게 시설이 운영되고 있다.
해당 휴게소의 명칭은 소재지인 이서면에서 유래하였다. 주요 기능은 고속도로 이용객을 위한 휴식 공간 제공 및 차량 정비 지원이다. 시설 내부에는 주차장, 화장실, 식당가, 편의점, 주유소 및 LPG 충전소 등이 갖추어져 있다. 또한 최근의 전기차 보급 확대에 따라 전기차 충전 시설이 설치되어 운영 중이다.
식당가에서는 비빔밥과 꼬막을 활용한 메뉴 등 지역의 특성을 반영한 음식을 판매하며, 특정 방송 매체를 통해 간식류가 소개되면서 대중적인 인지도가 높아진 바 있다. 인근에는 전북혁신도시가 위치하여 지리적으로 전주 및 완주 지역의 주요 교통 거점 역할을 수행한다.
이서휴게소는 한국도로공사 또는 민간 운영사에 의해 관리되며, 이용객의 편의를 위해 지속적으로 시설 개선 및 서비스 확충이 이루어지고 있다.
